酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种广泛应用于生物学和医学领域的技术，它基于酶标记抗体与抗原或抗体的特异性结合，通过颜色反应来定量分析样品中的特定物质。

ELISA实验原理

1.酶标记抗体的制备

原理：将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，形成酶标记抗体。

特点：这种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。

2.固相载体的包被

原理：将特异性抗体吸附于固相载体表面，称为包被或致敏。

过程：将抗原和抗体吸附到固相载体表面，通过孵育和洗涤步骤完成。

3.特异性结合

原理：酶标记抗体与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

作用：这种结合是特异性的，可以用于检测特定的抗原或抗体。

4.底物反应与颜色变化

原理：滴加底物溶液后，底物在酶作用下发生反应，使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型。

结果：出现颜色反应，通过底物的颜色变化来定量分析样品中的特定物质。

影响因素与优化

1.孵育和洗涤过程

问题：在孵育或洗涤过程中，已吸附的抗原可能有部分会从固相载体上被洗涤下来。

后果：增加本底颜色，产生假阳性反应。

优化：在稀释剂及洗涤剂中加入各种添加剂，以提高实验的特异性和准确性。

2.混合与反应效率

原理：利用旋转和振荡的方式，使试剂与血清样本充分混合，提高反应效率。

作用：从而得到准确的实验结果。

3.电压设置与信号检测

原理：在设置电压时，通常可从仪器校准后的仪器设置开始。

步骤：检查每个通道的阳性信号是否在标度范围内，若阳性信号过高，可降低通道电压。

重要性：确保染色的群体在标度范围内，这对于检测实验所使用的细胞是必需的。

ELISA技术通过酶标记抗体与抗原或抗体的特异性结合，结合颜色反应，实现对特定物质的定量分析。了解其原理、优化实验条件，对于提高实验效率和准确性至关重要。